Томская область находится в активном очаге клещевого энцефалита (КЭ) и по заболеваемости в 2000 году она занимала в Российской Федерации второе место после Удмуртии [2]. Особенность современной ситуации с клещевым энцефалитом заключается в резком увеличении числа переносчиков вируса КЭ (ВКЭ) и расширении их ареала, связанные, главным образом, с прекращением обработки лесных массивов препаратом ДДТ. Поэтому основным действенным средством профилактики заболевания КЭ в настоящее время является вакцинация населения. В связи с этим ученые предлагают пересмотреть тактику вакцинопрофилактики КЭ путем увеличения числа вакцинированных в несколько раз. При массовой вакцинации еще острее будет ощущаться негативная роль экономических, стрессовых и других социальных факторов жизни нашего общества. Отсюда возрастают и требования к качеству вакцины. В отечественных вакцинах (московской и томской) содержится ряд веществ, которые создают ограничения к их применению в целях массовой профилактики населения, особенно детей, людей пожилого возраста и людей, склонных к аллергическим реакциям.

В работе использовали полуфабрикат вакцины производства ФГУП "НПО ВИРИОН" после инактивации, очистку которого производили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). При выполнении исследований использовали инструментальную базу, торговые сорбенты и колонки шведской фирмы Pharmacia Biotechnology. В частности, аналитическая часть выполнялась на приборе HPLC DfB серии 2100, с использованием диодно-матричного детектора RSD-2150 и многоволнового УФ-детектора VWM-2141. Препаративная- на приборе FPLC этой же фирмы.

Общий белок в исходном субстрате вакцины и препаратах после очистки определяли по Lowry O.H. et al. [5] и по ФС 42-3259-96 [4].

Количественное определение белка куриного эмбриона и белка мозга мыши производили методом встречного иммуноэлектрофореза по [3], в авторской модификации.

Специфическую безопасность, стерильность, токсичность, реактогенность, пирогенность, рН, количество алюминия в вакцинных препаратах и их иммуногенность определяли также по ФС 42-3259-96. Кроме того, контроль иммуногенности некоторых серий очищенных вакцинных препаратов проводили на мышах Balb/C по методу, разработанному авторами.

• определение диапазона нахождения молекулярных масс анализируемых компонентов и выбор независимого метода индикации АВКЭ;
• ориентировочное установление изоэлектрических точек (pI) для основных компонентов смеси и АВКЭ и диапазона значений рН, в который они укладываются. Обнаружение различий между компонентами по степени гидрофобности, растворимости и т.д.;

С использованием слабого ионообменника были наработаны 10 экспериментальных полупрепаративных серий очищенной вакцины против КЭ. Их основные параметры приведены в таблице. Шесть из десяти приготовленных серий являются иммуногенными. Из четырех серий, не прошедших тест на иммуногенность, три были изготовлены из полуфабриката со слабой антигенной активностью в ИФА (1:8). Из полуфабрикатов такой же антигенной активностью (1:8) были приготовлены 7 и 8 серии, но антиген вируса КЭ был сконцентрирован нами (в 7- в 2 раза, в 8- в 1,6 раза). Трудно сказать, почему не прошла тест на иммуногенность 9 серия. Возможно, причиной явились недоброкачественные мыши, на которых проводился контроль. Свидетельством этому является 10 серия, которая проверялась дважды: сначала был определен МИД₅₀- 0,022 мл, в повторном опыте на других мышах МИД₅₀ был 0,047 мл (контроль иммуногенности считается положительным, если значение МИД₅₀ не превышает 0,025 мл). Необходимо отметить, что определение протективной способности вакцины по ФС 42-3259-96 на 7-9 день после иммунизации мышей является некорректным для очищенной вакцины, т.к. истинная защита на введение очищенного АВКЭ наступает только при образовании специфических антител против КЭ, т.е. на 14-21 день. В то время, как защита на введение неочищенной от балластных белков вакцины наступает в более ранние сроки, то есть 7-9 день, предусмотренные ФС. Причем в эти сроки срабатывают в основном факторы неспецифической защиты на неспецифические антигены (фагоциты, интерфероны, интерлейкины и т.д.). Этим можно объяснить несколько лучшие показатели иммуногенности неочищенной вакцины по сравнению с очищенной (см. табл.). Однако, иммуногенность очищенной вакцины, изученная в одном опыте (на одной партии мышей), оказалась значительно выше по авторским схемам, чем определенная по ФС (3 серия, см. табл.). В связи с изложенным, нами внесены изменения в контроль иммуногенности очищенной вакцины.

Реактогенность 1и 2 серии была вызвана наличием в элюенте KCl, который в дальнейшем был заменен на NaCl.

Таким образом, на основании предварительных экспериментальных исследований разработаны научные основы создания новой очищенной вакцины. Получены приоритетные данные (приоритет № 2001120868 от 25.07.01).

В плане создания безопасной вакцины помимо очистки от балластных белков, формалина, антибиотиков, нейтрального красного в дальнейших исследованиях планируем заменить ЧСА, добавляемый в качестве стабилизатора АВКЭ, и гидроокись алюминия, применяемую в качестве адъюванта, на безопасный синтетический препарат. Опасность ЧСА заключается в том, что он может быть кантаминирован возбудителями инфекций (медленные инфекции человека, их насчитывается в настоящее время 6 видов), для индикации которых пока не существует диагностических методов. Гидроокись алюминия, как оказалось, является слабым иммуностимулятором и, в некоторых случаях, индуцирует продукцию IgE и стимулирует развитие аллергических реакций [1]. Поэтому при использовании гидроокиси алюминия даже очищенная вакцина может вызывать аллергические реакции, особенно у аллергиков.

1. Криворутченко Ю. Л. Использование мурамилпептидов в вирусных вакцинах// Вопр. Вирусол.- 1999.- № 1.- С.4-8.
2. Онищенко В. В. Распространение вирусных природно-очаговых инфекций в Российской Федерации и меры их профилактики//Эпидемиология и инфекционные болезни.-2000.- № 4.- С.4-8.
3. Остерман Л. А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами.- М.:Наука, 1983.- 303 с.
4. ФС 42-3259-96. Фармакопейная статья на вакцину клещевого энцефалита культуральную сорбированную инактивированную жидкую.
5. Lowry O. H., Rosenbrough N. J., Farr A. L., Randell R. J. Protein measurement with the Folin phenol reagent H.J.// Biol. Chem..-1951.-V.193.-P.265-268.

• Сравнительные исследования по вакцинам
• вакцина ФГУП НО "ВИРИОН"
• вакцина фирмы "ИММУНО" (Австрия)